Действие ДНК-связывающихся биологически активных соединений на состояние ядра и хроматина и проницаемость мембран клеток буккального эпителия человека
Данное исследование было проведено с целью выявления зависимости клеточного отклика от концентрации каждого из исследуемых препаратов (DOX, EB, PF) и времени экспозиции, а также определения оптимальных условий для последующего исследования этих соединений в комбинации с молекулами-интерцепторами.
Производилось комплексное исследование электрокинетических свойств ядер и состояния хроматина, а также проницаемости клеточной мембраны, на основании измерения соответствующих параметров: показатели ЭОЯ, КГГ и барьерной функции мембран (показатель ОКИ) относительно контрольного образца при воздействии исследуемого вещества на клетки буккального эпителия. В работе рассматривался диапазон времен экспозиции клеточной культуры в присутствии препаратов от 10 мин до 3 час при концентрациях препаратов от 10 до 10 моль/л. Полученные результаты (таблицы с данными измерений, а также результаты t-теста Стьюдента) представлены в таблице Б.1 в Приложении, а также на рис. 4.1 (средние значения показателей ± стандартная ошибка среднего).Анализ влияния действующих веществ DOX, EB, PF на проницаемость мембран клеток буккального эпителия показал, что процент ОКИ для каждого образца остается неизменным в пределах диапазона статистической незначимости различия при всех исследованных концентрациях, временах экспозиции и для всех доноров. Следовательно, ни один из препаратов не вызывает изменения барьерной функции клеточных мембран и этот параметр может быть исключен из дальнейшего рассмотрения. Вместе с тем изменения в структуре гетерохроматина и электроотрицательности ядер являются очевидными.
| КГГ КГГ КГГ |
| Рисунок 4.1. Влияние ДНК-связывающихся препаратов на состояние ядра (ЭОЯ) и хроматина (КГГ) и проницаемость мембран (ОКИ) клеток буккального эпителия человека; * - статистически значимое отклонение от контрольного значения |
Из приведенных гистограмм следует увеличение параметра КГГ в зависимости от концентрации и времени экспозиции. Было выявлено, что уже после 10 мин экспозиции DOX при концентрациях 5 10-8-5 10-6 моль/л в клетках буккального эпителия наблюдается статистически значимое увеличение КГГ, в то время как для EB и PF подобный отклик имеет место при концентрациях от 110-6 моль/л и 110-5 моль/л соответственно.
При дальнейшем увеличении времени экспозиции до 1 часа увеличение числа гранул гетерохроматина наблюдается при всех исследуемых концентрациях.Изменение показателя ЭОЯ проявляет отрицательную корреляцию с показателем КГГ для всех исследуемых веществ. Подобная корреляция между электроотрицательностью клеточного ядра и состоянием хроматина была установлена ранее [31] и указывает на единообразный характер проявления механизма действия препаратов на состояние ядра. В подразделах 2.2 и 2.3 было упомянуто, что и грануляция гетерохроматина, и уменьшение показателя ЭОЯ указывают на уменьшение функциональной активности ядер. Наиболее интенсивные изменения ЭОЯ в клетках буккального эпителия наблюдаются в присутствии DOX при максимальной концентрации 5 10-5 моль/л начиная с 10 мин экспозиции. Подобная картина, но в меньшей степени, наблюдается и в присутствии EB. PF оказывает более слабое влияние на электрокинетические свойства ядер, так как статистически значимый отклик клеток наблюдается после часа экспозиции только для максимальной концентрации вещества.
Результаты проведенного исследования в целом соответствуют имеющимся на данный момент сведениям о генотоксическом действии исследуемых ДНК-интеркаляторов. В частности, есть свидетельства о том, что DOX вызывает хромосомные аберрации в лейкоцитах человека [270], в соматических и герминальных клетках мышей [41], а также приводит к апоптозу посредством оксидативного стресса [183]. Под действием EB наблюдалась конденсация хроматина в лимфоцитах человека [50] и положительная суперспирализация ДНК в клетках E.coli [269]. PF вызывает
4.2.2
Еще по теме Действие ДНК-связывающихся биологически активных соединений на состояние ядра и хроматина и проницаемость мембран клеток буккального эпителия человека:
- ВВЕДЕНИЕ
- Действие ДНК-связывающихся биологически активных соединений на состояние ядра и хроматина и проницаемость мембран клеток буккального эпителия человека
- Выводы