Действие фуллерена С60 и CAF на состояние ядра и хроматина и проницаемость мембран клеток буккального эпителия человека
Для определения возможного влияния фуллерена С60 и CAF на клетки буккального эпителия был проведен эксперимент, подобный изложенному выше с ДНК-связывающимися препаратами.
Рассматривался диапазон времен экспозиции в присутствии препаратов от 10 мин до 3 час при концентрациях фуллерена С60 от 5 10 до 5 10 моль/л и CAF от 2 10 до 110 моль/л. Полученные результаты (таблицы с данными измерений, а также результаты t- теста Стьюдента) представлены в таблице Б.2 в Приложении, а также на рис.4.2 (средние значения показателей ± стандартная ошибка среднего).
Исследование действия С60 фуллерена и CAF на клетки буккального эпителия показало, что для всех рассмотренных концентраций и доноров не наблюдается статистически значимых изменений ни в одном показателе. Отсюда следует, что С60 фуллерен и CAF сами по себе не проявляют выраженного повреждающего действия на клеточные мембраны и ядро в условиях эксперимента. Этот результат находится в согласии с распространенным мнением о нетоксичности немодифицированного C60 фуллерена и CAF к клеточным органеллам [206, 248].
Как уже упоминалось ранее в подразделе 1.3.2, фуллерен С60 и CAF не действуют на ДНК и проявляют биологический синергизм in vitro косвенно путем комплексообразования с другими БАС [70, 111, 115, 179], что соответствует полученным выше результатам на клетках буккального эпителия. Принимая во внимание изменения в структуре хроматина и электроотрицательности ядер под действием DOX/EB/PF, представленные на рис. 4.1, можно сделать вывод, что исследуемые препараты при введении в клеточную суспензию действуют непосредственно на уровне хроматина, при этом фуллерен С60 и CAF не оказывают на ДНК видимого прямого воздействия.
| Рисунок 4.2. Влияние фуллерена С60 и CAF на состояние ядра (ЭОЯ) и хроматина (КГГ) и проницаемость мембран (ОКИ) клеток буккального эпителия человека; * - статистически значимое отклонение от контрольного значения |
В целом, по результатам исследования индивидуального действия БАС на клетки буккального эпителия человека можно сделать следующие выводы:
1) действие исследуемых веществ DOX, EB и PF проявляется только на уровне гетерохроматина клеточного ядра и не проявляется на уровне мембраны.
Косвенно это указывает на ДНК-зависимый механизм действия данных препаратов на функциональное состояние клетки. В главе 3 было показано, что показатель ОКИ характеризовался слабой чувствительностью, и характер его изменения был индивидуален для каждого донора. Таким образом, полученные результаты позволяют в дальнейшем исключить тест на проницаемость мембраны как показатель биологического воздействия исследуемых препаратов;2) действие фуллерена С60 и CAF не проявляется ни на уровне ядра, ни на уровне мембраны. Во-первых, это позволяет исключить влияние данных веществ на состояние клетки, оцениваемое по изменению параметров КГГ, ОКИ и ЭОЯ, при последующем исследовании совместного действия препаратов и ЭМИ. Во-вторых, косвенно это указывает на отсутствие выраженных биологических последствий возможного действия C60 фуллерена и CAF непосредственно с ДНК или другими клеточными компонентами.
4.3.