Комбинированное действие ДНК-связывающихся препаратов в присутствии CAF на биолюминесценцию культуры светящихся бактерий P. leiognathi Sh1
При изучении совместного действия кофеина и ДНК-интеркаляторов с использованием методики оценки острого действия (1 ч) было установлено, что при соотношениях кофеин/препарат приблизительно 100:1 (моль/моль) происходит восстановление биолюминесценции до уровня 100% (рис.
5.13). При использовании методики оценки хронической токсичности, наблюдалась концентрационно-зависимая отмена разнонаправленного действия интеркаляторов на светящиеся бактерии под действием CAF, которая выражалась в снижении биолюминесценции, активированной EB, и восстановлении свечения, ингибированного PF (рис. 5.14). Отмеченные эффекты наблюдались при соотношениях CAF/препарат 100-200, что совпадает с результатами, полученными при использовании методики оценки острого действия.| Рисунок 5.13. Острое действие PF и EB в присутствии CAF (по оси X: К/П - соотношение кофеин/препарат, моль/моль). |
| Рисунок 5.14. Хроническое действие PF и EB в присутствии CAF (по оси Х: К/П - соотношение кофеин/препарат, моль/моль). |
Таким образом, несмотря на разнонаправленность действия исследуемых веществ, полученные результаты указывают на «протекторный эффект» кофеина по отношению, как к мутагенному, так и токсическому действиям ДНК-интеркаляторов. Как уже упоминалось ранее, концентрационнозависимый протекторный эффект кофеина в различных клеточных [266] и бактериальных [200, 280] системах в присутствии токсичных ароматических соединений известен в литературе достаточно давно. Важно подчеркнуть, что в системах Препарат-CAF типичный протекторный эффект проявляется при концентрациях CAF на 2-3 порядка больших, чем концентрации действующего вещества, что хорошо согласуется с соотношением концентраций CAF/Препарат, представленным на рис. 5.13.
Полученные результаты также показывают, что одни и те же концентрации кофеина защищают как от мутагенного эффекта EB, так и от токсического эффекта PF. Согласно теории интерцепторно-протекторного действия [114, 116] протекторный эффект CAF в отношении PF должен проявляться в большей степени, чем в системе EB-CAF вследствие более высокой константы гетероассоциации PF-CAF (Kh=160 моль-1) по сравнению с EB-CAF (Kh=62 моль-1) [116]. Полноценная проверка этой гипотезы в рамках настоящей работы не представляется возможной, так же как и определение численного значения фактора AD, как было сделано в предыдущем подразделе 5.4. Вместе с тем предварительные данные указывают на то, что в исследуемых системах при коротковременной экспозиции препаратов, кофеина и бактерий происходит однонаправленное ингибирование биолюминесценции под действием интеркаляторов, оказывающее наибольшее влияние именно на систему с PF, в то время как в системе EB-CAF эффект ингибирования выражен намного слабее, что косвенно согласуется с предсказанием теории интерцепторно-протекторного действия.В целом, обнаруженный в данном исследовании концентрационнозависимый протекторный эффект действия CAF на биолюминесценцию культуры светящихся бактерий P. leiognathi Sh1, содержащую типичные мутагенные препараты PF и EB, заключающийся в восстановлении биолюминесцентного сигнала при введении CAF, соответствует результатам, полученным выше на непролиферирующих клетках буккального эпителия человека. Следовательно, наблюдаемый на двух клеточных линиях с помощью различных методик эффект комбинированного воздействия БАС подтверждает выдвинутое ранее предположение, что в основе наблюдаемого эффекта лежит нековалентное комплексообразование (гетероассоциация) препарата с молекулами-интерцепторами.
5.6.