Определение токсичности веществ

Клетки инкубировались с перечисленными веществами при различных концентрациях в течение 10 мин, 1 часа и 3 часов при температуре 36±1°С для определения воздействия исследуемых веществ на мембраны и ядра клеток буккального эпителия, а также оптимальных условий для основного эксперимента.

2.7.3. Определение изменения токсичности препарата при добавлении интерцепторов (фуллерена или кофеина)

Для основного этапа экспериментов в отдельной пробирке смешивали 0.05 мл полученного раствора препарата с 0.95 мл раствора фуллерена или кофеина (получив 110^-5 моль/л раствор доксорубицина или 2 10^-5 моль/л раствор бромистого этидия или профлавина с 1.32 10^-4 моль/л фуллерена или 9.510 моль/л кофеина). В 0.2 мл препарата добавляли 3.8 мл буферного раствора, получив раствор препарата для титрования (1 10^-5 моль/л для раствора доксорубицина и 2 10^-5 моль/л для раствора бромистого этидия или профлавина).

В 0.5 мл клеточной суспензии добавляли 0.5 мл смеси препаратинтерцептор с различной концентрацией фуллерена или кофеина (стартовая концентрация фуллерена до титрования составила 6.610^-5 моль/л, кофеина -

-3

4.75 10 моль/л). Затем клетки инкубировались в полученных растворах в течение 1 часа при температуре 36±1°С.

В качестве позитивного контроля рассматривались клетки, которые инкубировались только в растворе препарата, в качестве негативного - клетки, содержавшиеся без препарата и интерцепторов при той же температуре.

1.5. Метод спектрофотометрии

Спектры были сняты с использованием двухлучевого спектрофотометра SQ-4802 (UNICO, США), позволяющего выполнять измерения в диапазоне длин волн 280-800 нм. Снятие спектров проводилось в полиметилакрилатных кюветах (Испания), имеющих длину оптического пути 1 см, при комнатной температуре.

1.6. Методы статистической обработки данных

Расчеты средних значений и стандартных ошибок среднего производили в программе Microsoft Office Excel и SigmaPlot. Достоверность различий между средними значениями полученных показателей и контролями оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. С целью оценки статистической связи между полученными данными и влиянием различных факторов, в программе SigmaStat

Представленные в данной главе методики по внутриклеточному микроэлектрофорезу, облучению на частоте 3.7 ГГц а также электрической и магнитной составляющими ЭМИ были подробно изложены и использованы в следующих работах [19, 20, 127].